肉汤培养基接种步骤？

发布时间：2025-06-08 06:20编辑：白云鲜花网归类：花卉繁殖

一、肉汤培养基接种步骤？

培养步骤如下，

1. 称取本品 37g,加入蒸馏水或去离子水 1 L,搅拌加热煮沸至完全溶解, 分装于带有小倒管的试管中,121℃高压灭菌 15min,

2. 用接种环将所有产气的乳糖胆盐发酵管或 LST 肉汤管培养物转种于 EC 肉汤管中。

3. 将 EC 肉汤管置 44.5±0.2℃水浴箱内，培养24h。

4.观察结果，按产气管数，查mpn值即可。

二、固体培养基接种的步骤？

1.1器皿准备

培养基制备过程中所用的一些玻璃器皿，如，三角瓶、试管、培养皿、烧杯、吸管等，经洗涤、干燥、包装、灭菌后使用。

1.2溶解培养基配料

先在烧杯中放适量水，按培养基配方称取各项材料，依次将缓冲化合物、主要元素、微量元素、维生素等材料加入水中溶解，最后加足水量，搅拌均匀。

1.3调pH值

配料溶解后将培养基冷却至室温，根据要求加稀酸（0.1mol/L盐酸）或稀碱(10%氢氧化钠)调pH值。加酸或碱液时要缓慢、少量、多次搅拌，防止局部过碱或过酸而导致测量不准确和营养成分被破坏。

1.4加凝固剂

配制固体培养基时需加凝固剂，如，琼脂、明胶等。将凝固剂加入液体培养基中，加热并不断搅拌至融解，再补足所蒸发水分。

1.5过滤分装

在二层纱布中间夹入脱脂棉，将配好的培养基趁热过滤并分装。斜面培养基分装量约为试管高度的四分之一(4～5mL)，穿刺培养基分装量以试管高度的二分之一为宜。分装过程中勿使培养基沾污管口，以免弄湿棉塞造成污染。

1.6包扎标记

将试管加棉塞，外面包扎一层牛皮纸或铝箔并注明培养基名称及配制日期。

1.7灭菌

根据要求将培养基灭菌，通常蒸汽灭菌为121℃，15～20min。

1.8斜面摆放

灭菌后及时摆放斜面，斜面长度不超过试管管长的二分之一为宜。

1.9无菌检查

将灭菌的培养基放入培养箱中作无菌检验，通常30℃培养1～3天。无菌检查合格后将其保存于4℃下备用。

三、简述动物接种培养的过程？

一、准备工作

准备工作对开展细胞培养异常重要，工作量也较大，应给予足够的重视，准备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试。

二、取材

在无菌环境下从机体取出某种组织细胞（视实验目的而定），经过一定的处理（如消化分散细胞、分离等）后接入培养器皿中，这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的组织细胞的首次培养称为原代培养。

理论上讲各种动物和人体内的所有组织都可以用于培养，实际上幼体组织（尤其是胚胎组织）比成年个体的组织容易培养，分化程度低的组织比分化高的容易培养，肿瘤组织比正常组织容易培养。

取材后应立即处理，尽快培养，因故不能马上培养时，可将组织块切成黄豆般大的小块，置4℃的培养液中保存。取组织时应严格保持无菌，同时也要避免接触其他的有害物质。取病理组织和皮肤及消化道上皮细胞时容易带菌，为减少污染可用抗菌素处理。

三、培养

将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。如系组织块培养，则直接将组织块接入培养器皿底部，几个小时后组织块可贴牢在底部，再加入培养基。如系细胞培养，一般应在接入培养器皿之前进行细胞计数，按要求以一定的量（以每毫升细胞数表示）接入培养器皿并直接加入培养基。细胞进入培养器皿后，立即放入培养箱中，使细胞尽早进入生长状态。

正在培养中的细胞应每隔一定时间观察一次，观察的内容包括细胞是否生长良好，形态是否正常，有无污染，培养基的PH是否太酸或太碱（由酚红指示剂指示），此外对培养温度和CO2浓度也要定时检查。一般原代培养进入培养后有一段潜伏期（数小时到数十天不等），在潜伏期细胞一般不分裂，但可贴壁和游走。过了潜伏期后细胞进入旺盛的分裂生长期。

细胞长满瓶底后要进行传代培养，将一瓶中的细胞消化悬浮后分至两到三瓶继续培养。每传代一次称为“一代”。二倍体细胞一般只能传几十代，而转化细胞系或细胞株则可无限地传代下去。转化细胞可能具有恶性性质，也可能仅有不死性（Immortality）而无恶性。培养正在生长中的细胞是进行各种生物医学实验的良好材料。

四、冻存及复苏

为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，要将细胞冻存。冻存的温度一般用液氮的温度—－196℃，将细胞收集至冻存管中加入含保护剂（一般为二甲亚砜或甘油）的培养基，以一定的冷却速度冻存，最终保存于液氮中。

在极低的温度下，细胞保存的时间几乎是无限的。复苏一般采用快融方法，即从液氮中取出冻存管后，立即放入37℃水中，使之在一分钟内迅速融解。然后将细胞转入培养器皿中进行培养。冻存过程中保护剂的选用、细胞密度、降温速度及复苏时温度、融化速度等都对细胞活力有影响。

扩展资料：

进入细胞间开始细胞培养时，注意事项：

①确定所有的细胞操作用的溶液和耗材都已经消毒并检测没有问题，不确定的溶液和耗材请勿使用，除非特殊情况，不要借用别人的溶液。

②确定衣服的袖口已经卷起或者白大褂的袖口已经扎紧。

③确定酒精灯内的酒精量，需要的话及时进行补充。

④确定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置。为了方便单手开启瓶盖，实验开始前可以把所有瓶盖旋松。

⑤尽量不要直接倾倒溶液，除非瓶口没有被烧坏。如果倾倒失败，溶液粘在瓶口，请用喷过75%酒精的纸巾仔细清洁瓶口周围（不要接触到瓶口）后在火焰上简单烧灼。

⑥操作时如果不能肯定所用的耗材是洁净的，必须及时更换。

⑦实验完毕及时收拾，保持工作区域清洁整齐，最后用75%酒精清洁台面。

四、春栽香菇大棚接种消毒几天？

春季栽培香菇大棚接种前需要进行消毒处理以防止病虫害的侵害。通常情况下，建议进行连续两次的消毒处理，每次间隔3-5天。首先进行地面和设施的清理，然后使用有效的消毒剂对大棚进行喷洒或熏蒸处理。接种前必须确保消毒剂已经完全挥发，大棚内没有残留的有害物质。这样可以有效地减少病虫害的发生，提高香菇的产量和质量。因此，进行消毒处理至少需要6-10天的时间。

五、组织培养接种室包括哪些接种设备和工具？

接种室也是无菌操作室，主要设备及用品有：超净工作台，紫外灯，小推车、搁架，磁盘，接种工具（各种镊子、解剖刀、手术剪、普通剪刀、接种针、酒精灯、手持喷雾器、细菌过滤器等等），

六、培养皿接种后为什么要倒置培养？

1、倒置培养可以防止污染：为了防止正置培养时培养皿盖上出现的蒸馏水流到培养皿上，导致菌落成片，不能计数或分离等。同时也减少染菌的可能。

2、方便观察计数：平板倒置进行微生物培养时，培养基表面生长的菌落相对不会太快扩散，观察时有利于辨别菌落特征。

3、利于菌落出现：倒置后，琼脂表面不会残留水份，否则有水的话，细菌在表面生长成菌膜，菌落难以出现。

七、袋栽平菇接种后培养料产生酸臭味的原因是什么？

袋栽平菇时培养料产生酸臭味的原因有以下几点：

（1）培养料水分过多，料内氧气少，诱发嫌气性细菌和酵母菌大量繁殖，致使培养料变酸发臭；

（2）原料不新鲜，不干净，未经发酵处理或发酵不彻底，拌料播种后杂菌先于平菇菌种蔓延生长，致使培养料产生异味；

（3）菌丝培养阶段，因菌袋堆码重叠，料温增高，加上菇房过于密封，诱发曲霉、红色面包霉等喜高温杂菌孳生，培养料因此产生异味；

（4）培养基内氮素营养成分过高，与加入的石灰混合后起化学反应，产生氨臭。处理措施：

（1）拌料时控制水分，勿过干过湿。

以棉籽壳为主的培养料，料∶水以1∶1.3～1.4为宜，其他秸秆类原料，料∶水以1∶1.5～1.8为宜。

（2）袋栽平菇所用棉籽壳、玉米芯等原料应新鲜干净。拌料前暴晒1～2天，或充分发酵后再播种。

拌料时加入原料干重0.1%的多菌灵或托布津抑制杂菌；

（3）接种后根据气温变换堆码方式，控温调湿，适当开窗、开门通风换气；

（4）当培养料异味较轻时，可开袋换气，逐步消除酸臭味；

（5）当培养料异味严重时，应及早将培养料从袋内倒出，晾晒后加适量石灰，至pH 7.5左右，含水量58%左右重新播种。

如果培养料已腐烂发黑，就不宜再种菇。栽培场地散布的酸臭味，可用除臭剂除去。除臭剂配方：硫酸亚铁5份，硫酸氢钠95份，磨粉拌匀即成。

八、对峙培养步骤？

对峙培养法呢，就是将分离物溶解于有机试剂（如甲醇、丙酮）中内制成一定浓度药液．用微量注射器滴加在直径8毫米滤纸圆片上（用打孔器就可以了），制成具有一定剂量的药片（如果药量不够，就等药液干了过后再滴加，如此重复即可）．将药片置于PDA 平板一侧．然后在冰箱内存放3O分钟使药剂充分扩散．将供试菌进行前培养．用打孔器制成直径5毫米菌块，并置于平板另一侧．25±1℃ 培养48～72小时，当分离物具有抗菌活性时，菌丝扩展受到抑制而形成抑菌带。